藥敏實驗方法

1.1培養基：如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥康凱培養基，做沙門氏菌可選擇SS培養基，巴氏桿菌可選擇血液瓊脂。

1.2藥敏試紙：購買、自制或廠家提供

1.3**：從病雞病變部位提取，如肝臟、心臟、脾臟等臟器。

1.4接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯

1.5移液器、滴頭
 

2.實驗準備：

2.1藥敏片的準備：自制

2.1.1藥敏片的制備：取定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片，取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎，經15磅15-20分鐘高壓**后，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全干燥。

2.2.2**藥紙片制作：在上述含有50片紙片的青霉素瓶內加入藥液適量，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄**名稱，放37℃溫箱內過夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個月。

2.2藥液的制備（用于商品藥的試驗）：按商品藥**量3-5倍比例配制藥液；如**量為1L水加1g藥，配制藥液時就是1g加200-300ml水或1L水加3-5g藥，及配制藥敏片所用的藥液。
 

3.實驗操作方法：

3.1藥敏片法

3.1.1在“超凈臺”（或自制無菌操作臺）中，用（酒精燈）經火焰**的接種環從病料中挑取適量**培養物，以劃線方式將**涂布到平皿培養基上。具體方式：用**接種環取適量**分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2，然后找到**點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至**均勻密布于平皿。（另：可將待試**于少量生理鹽水中制成**混懸液，將少量混懸液倒入平皿培養基上，輕晃平皿使鋪勻，放置5-10min）。

3.1.2將鑷子于酒精燈火焰**后略停，取藥敏片貼到平皿培養基表面。為了使藥敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果，要求藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上，一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼4-5片），每種藥敏片的名稱要記住。

3.1.3將平皿培養基倒置放于37℃溫箱中培養24小時后，觀察效果。
 

4.結果觀察：

在涂有**的瓊脂平板上，****在瓊脂內向四周擴散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內的**生長受到抑制。過夜培養后形成一個抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與**濃度、劃線**濃度有直接關系。
 

5.判定標準：

5.1藥敏實驗的結果，應按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標準。

                                  表1   **敏感實驗判定標準

5.2 **敏感實驗判定標準參考表1，抑菌圈直徑在15毫米以上為高敏，10毫米以下為低敏，無抑菌圈為不敏。
 

6.影響藥敏結果的因素：

6.1培養基：應根據試驗菌的營養需要進行配制。傾注平板時，厚度合適（約5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的培養皿，傾注培養基18-20ml為宜。培養基內應盡量避免有****的拮抗物質，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的**活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

6.2**接種量：**接種量應恒定，如太多，抑菌圈變小，能產酶的菌株更可破壞**的**活性。

6.3**濃度：**的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結果，需**配制。

6.4培養時間：一般培養溫度和時間為37℃、12-24小時，有些**藥擴散慢如多粘菌素，可將已放好**藥的平板培養基，先置4℃冰箱內2-4小時，使**藥預擴散，然后再放37℃溫箱中培養，可以推遲**的生長，而得到較大的抑菌圈。