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药敏实验方法

                                                   药敏实验方法
1.实验材料:
1.1培养基:如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基,做沙门氏菌可选择SS培养基,巴氏杆菌可选择血液琼脂。
1.2药敏试纸:购买、自制或厂家提供
1.3**:从病鸡病变部位提取,如肝脏、心脏、脾脏等脏器。
1.4接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯
1.5移液器、滴头
 
2.实验准备:
2.1药敏片的准备:自制
2.1.1药敏片的制备:取定性滤纸,用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片,取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎,经15磅15-20分钟高压**后,放在37℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。
2.2.2**药纸片制作:在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液适量,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录**名称,放37℃温箱内过夜,干燥后即密封,切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月。
2.2药液的制备(用于商品药的试验):按商品药**量3-5倍比例配制药液;如**量为1L水加1g药,配制药液时就是1g加200-300ml水或1L水加3-5g药,及配制药敏片所用的药液。
 
3.实验操作方法:
3.1药敏片法
3.1.1在“超净台”(或自制无菌操作台)中,用(酒精灯)经火焰**的接种环从病料中挑取适量**培养物,以划线方式将**涂布到平皿培养基上。具体方式:用**接种环取适量**分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2,然后找到**点划线至平皿的1/2,依次划线,直至**均匀密布于平皿。(另:可将待试**于少量生理盐水中制成**混悬液,将少量混悬液倒入平皿培养基上,轻晃平皿使铺匀,放置5-10min)。
3.1.2将镊子于酒精灯火焰**后略停,取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴,可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果,要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上,一般可在平皿中央贴一片,外周可等距离贴若干片(外周一般可贴4-5片),每种药敏片的名称要记住。
3.1.3将平皿培养基倒置放于37℃温箱中培养24小时后,观察效果。
 
4.结果观察:
在涂有**的琼脂平板上,****在琼脂内向四周扩散,其浓度呈梯度递减,因此在纸片周围一定距离内的**生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈,抑菌圈越大,说明该菌对此药敏感性越大,反之越小,若无抑菌圈,则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与**浓度、划线**浓度有直接关系。
 
5.判定标准:
5.1药敏实验的结果,应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。
                                  表1   **敏感实验判定标准
抑菌圈直径(毫米)
 
敏感度
 
20以上
 
极敏
 
15-20
 
高敏
 
10-14
 
中敏
 
10以下
 
低敏
 
0
不敏
5.2 **敏感实验判定标准参考表1,抑菌圈直径在15毫米以上为高敏,10毫米以下为低敏,无抑菌圈为不敏。
 
6.影响药敏结果的因素:
6.1培养基:应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时,厚度合适(约5-6mm),不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有****的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的**活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。
6.2**接种量:**接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏**的**活性。
6.3**浓度:**的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需**配制。
6.4培养时间:一般培养温度和时间为37℃、12-24小时,有些**药扩散慢如多粘菌素,可将已放好**药的平板培养基,先置4℃冰箱内2-4小时,使**药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟**的生长,而得到较大的抑菌圈。
 
7.应用
药敏实验后,应选择高敏**进行**,也可选用两种**协助使用,以减少耐药菌株。在选择高敏**时应考虑**的吸收途径,因为我们药敏实验是药液直接和**接触,而在给禽用药的时候,必须通过机体的吸收才能使**达到一定的效果,所以在给禽用药时,高敏**一定要配合适宜的给**法,这样才会达到好的**效果。
附表2  山东省2004年1-5月份大肠杆菌和沙门氏菌常用**敏感程度参考表
 
**    
大肠杆菌 (**)
沙门氏菌(**)
QD-1(菌株)
LC-5
JN-7
LY-1
RZ-5
QD-2
JN-8
LY-1
 
新霉素
20(抑菌)
18
14
25
26
23
18
16
先锋必
28
26
30
29
32
33
31
26
氟苯尼考
22
21
14
18
30
28
24
21
庆大霉素
15
0
0
12
19
17
12
12
诺氟沙星
10
12
13
12
20
20
11
21
氧氟沙星
12
13
13
11
23
22
15
12
先锋五号
19
23
20
18
28
26
21
22
蒽诺沙星
12
14
15
13
20
16
13
16
丁胺卡那
17
19
12
22
32
30
14
22

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