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考馬斯亮藍

                                                                                      

考馬斯亮藍coomassie brilliant blue一定范圍內與蛋白質濃度成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。

考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。
考馬斯亮藍G-250在游離狀態下呈紅色，*大光吸收在465nm；當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有*大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比。考馬斯亮藍R-250與蛋白質反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

染色————————————————————————————————————

蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量，測定蛋白質濃度范圍為0～1 000μg/mL，是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。

 

考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。其中考馬斯亮藍G-250由于與蛋白質的結合反應十分迅速，常用來作為蛋白質含量的測定。考馬斯亮藍R-250與蛋白質反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

測定含量————————————————————————————————————

簡介

該方法用于大多數蛋白質的定量是比較**的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2%影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于細胞骨架的檢驗。

濃染液

將100mg考馬斯亮藍G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL濃磷酸，然后，用蒸餾水補充至200mL，此染液放4℃至少6個月保持穩定。

樣本準備

盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標準。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標準蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之間繪制標準曲線。

溶解

將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同(*好用PBS)。

稀釋

按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉淀，過濾除去。

作用

每個樣本加5mL
稀釋的染料結合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質結合后，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min．

計算

根據標準曲線計算待測樣本的濃度。

處理方法————————————————————————————————————

 

考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過范德華力結合，反應快速，并且穩定，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙。
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