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考马斯亮蓝

                                                                                      

考马斯亮蓝coomassie brilliant blue一定范围内与蛋白质浓度成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，*大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有*大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

染色————————————————————————————————————

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

 

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

测定含量————————————————————————————————————

简介

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较**的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

浓染液

将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200mL，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

样本准备

尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之间绘制标准曲线。

溶解

将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(*好用PBS)。

稀释

按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

作用

每个样本加5mL
稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．

计算

根据标准曲线计算待测样本的浓度。

处理方法————————————————————————————————————

 

考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。
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