**學方法
一、血清學反應
在體外進行的抗原與抗體的反應稱為血清學反應，常用來進行體外體液**功能的測定，傳染病的診斷和微生物的分類鑒定。
血清學反應的一般規律
1．反應的組成成分
(1)抗原。
(2)特異抗體。
(3)環境因素：包括基本因素和特殊環境因素。
基本因素：電解質、溫度和PH值。實驗室多采用0.85％的Nacl水溶液作電解液，溫度采用37℃或56℃；PH位采用7．0左右。特殊環境因素視具體反應而定。如補體，吞噬反應需白細胞。
2、反應的基本特點
(1)抗原與抗體的結合具有特異性。
(2)抗原與抗體是分子表面結合，雖相當穩定，但抗原的性質未變。如**與抗體結合后，生活能力未受影響。
(3)只有當抗原與抗體的分子比例適當時，才能結合成大的分子集團，出現肉眼可見的現象。P268圖9—12是沉淀反應曲線。抗體是雙價，抗原是多價的。
(4)抗原與抗體的結合受環境因素的影響，反應分為結合階段和反應階段。
(一)凝集反應：
顆粒性抗原與其特異性抗體在電解質存在條件下，結合成可見的凝集塊的反應，稱為凝集反應。
參加凝集反應的抗原叫凝集原，抗體叫凝集素。
(1)直接凝集反應：是抗原和相應抗體直接結合的凝集反應。常用的方法有玻片法和試管法。
(2)間接凝集反應：將分子很小膠體狀抗原吸附于載體顆粒表面，再與相應抗體結合的凝集反應，稱為間接凝集反應。
(3)交叉凝集和凝集吸收試驗：若甲、乙兩**有共同的抗原2，并分別含有特異抗原1和3，用甲**注射動物則產生抗體I和II。
交叉凝集反應：動物血清既能與甲**起凝集反歐又能夠與乙**起凝集反應，此即為交叉凝集反應。
凝集吸收試驗：若先用乙**吸收血清中的抗體，則剩下甲**的特異抗體。
（二）沉淀反應：
沉淀反應：可溶性抗原和相應抗體在電解質存在條件下，聚合成細微沉淀的反應。
沉淀原：參加沉淀反應的抗原。可溶性抗原，單位體積小，總面積大。
沉淀素：參加沉淀反應抗體。
沉淀反應與凝聚反應的區別：
凝聚反應：抗原是顆粒性的單個抗原體積大，表面積小，反應需抗體少。
沉淀反應：抗原是可溶性的，單個抗原體積小，總表面積大。反應需抗體多。
① 環狀沉淀試驗：在一系列試管中，先加入高濃度的**血清（抗體）再徐徐加入不同稀釋度的等量抗體，二者形成潔楚交界面，一定時間后，在交界面處出現環狀沉淀。此方法簡單、靈敏。所用被檢材料少、法原管定血速血型。
② 絮狀沉淀反應：在一 系列試管中加入抗血清（**血清），再加入不同稀釋度的等量抗原，混勻靜止一段時間，可出現血色沉淀或絮狀沉淀。可用于鑒別檢毒，**，類**及抗**的效行。
③ **擴散：是可溶性抗原與抗體在半固體瓊脂內擴散，并進行沉淀
A、 單向擴散：抗體與瓊脂混合加入試管底層，上層加抗原溶液，若抗原與抗體相對應，則會在瓊脂層的某一部位形成白色沉淀線。
若有數對抗原，抗體相對應，就會形成相應數量的分離沉淀線。單向擴散也可在平皿中進行。平皿中興建例入抗體，瓊脂，凝固，凝固后在平皿內瓊脂上挖孔。孔內加抗原，一定時間后，可形成白色沉淀環。
B、 雙向擴散：在試管層加抗體瓊脂，中層加電性瓊脂，上層加抗原。抗原，抗體均向中層擴散，并在中層形成沉淀線（1—多層）。
平皿：將半固體瓊脂傾于平皿或平板上，凝固后，挖一個洞，分別滴入抗原體，抗原，抗體向瓊脂中擴散。若二者相遇，即可在瓊脂層中形成沉淀線。
④**電泳
將瓊脂雙擴散與瓊脂電泳技術相結合的方法。待儉樣品(含復合抗原)先在瓊脂凝膠板上電泳，將抗原的各個組分在板上初步分開，然后再在點樣兒一側或兩側打槽，加入抗血清．進行雙向雙擴散。
(三)**熒光技術
抗體與某些特定的熒光物質結合而成為熒光標記抗體，特異性地結合抗原成為熒光標記的抗體抗原復合物．在熒光顯微鏡下可觀察到。熒光素與抗體結合能偵察出抗原所在部位，可用來進行抗原的定位或定性測定。
(四)放射**測定法
是將放射性同傳宗的靈敏性和**學抗原—抗體反應的特異性結合起來的一種定量分析方法，能檢測生物體液中的微量**活性物質。具有靈敏、特異、精密、準確和快速等特點。
(五)酶聯**吸附測定技術
陽聯5z僅吸附測定技術(ELISA)是把抗原、抗體的**反應和酶的高效催化反應有機結合而發展起來的一種綜合性技術，即通過化學的方法將酶與抗體或抗原結合起來形成酶標抗體(抗原)。酶標抗體(抗原)仍保持**活性，將它與相應抗原(抗體)起反應，形成酶標記的**復合物。結合在**復合物上的酶，在遇到底物時，形成有色產物。有色產物可通過比色等方法分析測定，從而可定性定量分析抗原或抗體。
（六）補體結合反應：
補體是人和動物血清中的正常蛋白質。它無特異性，不能單獨與抗原或抗體結合，只能與抗原、抗體復合物結合。補體、抗原和許多抗原可溶性是它們反應不易觀察，故需指示系統。
① 反應系統：抗原、抗體、補體。
② 指示系統：綿羊紅細胞，和綿羊紅細胞抗體。
③ 反應結果：
A、 陽性（+）：若抗原與抗體相對應，二者形成抗原，抗體復合物。補體與抗原抗體復合物結合，而無游離的補體存在，這時再加入綿羊紅細胞（抗原）和綿羊紅細胞抗體，二者雖可形成復合物。但由于無補體存在與之結合，則綿羊紅細胞不含溶解。故無溶血現象，此反應為陽性反應。
B、 陰性（-）反應：若眼補體存在則有溶血現象為陰性反應。補體不耐熱，56℃易失活，補體結合溫度為37℃。
用途：補體結合反應常用于梅毒螺旋體及病毒性**的診斷。
二、單克隆抗體技術及其應用
l975年，證明：骨髓瘤細胞與**動物的脾細胞融合形成的雜交瘤細胞，能分泌針對**抗原中的一種抗體。雜交瘤細胞一經建立即具備腫瘤細胞在體外無限繁殖和脾細胞產生抗體的雙重功能。經過克隆選擇獲得單一的克隆。
只產生一種針對單一抗原表位的抗體，稱單克隆抗體(McAb)。
單克隆抗體是針對多克降抗體而言的。天然抗原物質是一種復雜的大分子物質，其表面通常具有多個抗原表位。一種抗原物質的多個抗原表位刺激多個**細胞增殖產生多種抗體。屬多克隆抗體。
單克隆抗體稱為**代抗體，它的問世顯示出巳大的生命力和廣闊的發展前景。在生物學各領域，尤其是在**診斷中的廣泛應用，己取得令人矚目的進展，而在**和預防中的應用也已成為可能。獲得了l984年諾貝爾醫學或生理學獎。
(一)單克隆抗體的制備
骨髓瘤細胞具有反復傳代的能力，**動物的脾細胞具有分泌抗體的能力．將兩者雜交獲得的雜交瘤細胞既能在體外傳代又能分泌單克隆抗體。制備單抗時首先用抗原**動物，然后取出動物的脾制備脾細胞，將脾細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合，選擇分泌單克隆抗體的雜文瘤細胞。
(二)單克隆抗體的應用
1．器官移植
用于腎移植受體的**抑制，使腎中的**細胞減少，取得了好的結果。
2．腫瘤治腎
單抗與化療、放療手術相結合，是腫瘤**的一大發展。對彌散性腫瘤，用單抗**較有效。
3．自身**病**
采取體內及體外兩種方法。
體外**法：用單抗親合層析柱除去血液中的自身抗體。
體內**法：注射自身抗體產生細胞的單抗。
4．**缺陷癥**
與自身**性**相反，**缺陷病則為出于**系統的缺陷，不能保護機體抗御感染。艾滋病是由于病毒對輔助性T細胞的感染及破壞使患者的**系統不能正常發揮作用，因而對正常人可以抵抗的感染患者卻易感。CD4為輔助性T細胞上的病毒受體，抗CD4的抗獨特型抗體可守和病毒從而阻斷其感染。
5．**
有機磷中毒在農業生產中時有發生，單抗夠中和此毒物的毒性。
6．在傳染病臨床診斷學中的應用
McAb有助于快速鑒定臨床分離物，可直接檢測臨床標本而早期診斷多種傳染病。目前已制備出HBsAg、HBeAg、HBcAg及HAV的單抗，并已用于乙型肝炎的臨床診斷、流行病學的調查及獻血者的篩選。單抗還用于研究抗原等領域。
單克隆抗體的發展主要表現在兩方面：
一是對雜文瘤基本技術的改進以解決在短期內微量、弱抗原性抗原的單克隆抗體和人單電隆抗體的制備問題。
二是基因工程抗體的不斷摧新，特別是采用原核細胞系統來分離、生產整套抗體，既快速義簡便、為單抗生產開辟了一條新途徑。
三、基因工程抗體 稱為第三代抗體。
基因工程抗體的優點：抗原性低、可按人的意愿加以改造等。
逐漸取代動物源性單抗。
單鏈抗體（單鏈可變區片段）：是將抗體重鏈可變區和輕鏈可變區用一個連接肽連接成為一個單個的多脹。單鏈抗體能較好地保持親代抗體的親和性和特異性．是一種新的基因**的手段。
雙鏈抗體：是將兩種抗體的重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)基因交叉連接．形成‘雜交”的單鏈抗體基因，表達后，兩條單鏈抗體雙鏈抗體自動互相折疊，形成以加或雙特異性抗體片段。
****：又稱生物導彈，由導向性的載體分子與具有毒性的彈頭蛋白進行交聯制備，是導向**的一種，主要用于**腫瘤。由基因工程抗體和一些配基取代單抗，彈頭蛋白也豐富了許多。基因融和可克服化學文聯所產生的交聯物均一性差的缺點。
四、天然**與獲得性**
特異性**的獲得方式可分為（天）自然**和人工**兩大類，每—類又有自動**和被動**兩種形式。
自動**和被動**的區別：
（1）自動**：產生慢(1--4周)，可表現出再次反應或增強反應，維持的時間長，半年到數年甚至終身。
（2）被動**：使機體立即獲得**力，產生快，不表現出增強反比，維持的時間短，2—3周。用于**某些傳染病或預防。
(一)天然**
天然**（自然特異性獲得性**）：是機體在生活過程中自然建立起來的。
患過天花、麻疹、傷寒等傳染病或隱性感染后．就可獲得對上述**的**力。胎兒通過胎盤或嬰兒通過母乳也可從母體獲得**力。
自然自動**：傳染病或隱性感染后所獲得的**力是機體受微生物抗原刺激后，在自然情況下自體產生的**力。
自然被動**：通過胎盤或母乳獲得的**力是母體在自然情況廠產生的，而不是自己產生的。
(二)人工**
通過人為的方式獲得自動**與被動**。
人工自動**：人工給機體注射抗原物質，使機體**系統因抗原刺激而發生類似感染時所發生的**過程，從而獲得特異性**力。
人工被動**：人工給機體注入**血清(含特異性抗體)使機體直接獲得一定的**力。
(三)生物制品
凡是人工**用的抗原和抗體制品以及診斷用的抗原和抗體制品。
分為疫苗、類**和**血清三大類。
前兩類用于人工自動**，后一類用于人工被動**。
(一)疫苗
由病原微生物本身制備而成。**制品常稱為菌苗立克次氏體制品常稱為疫苗。
1．活疫苗：用失去毒力或減低毒力，但仍保持抗原性的病原體突變體制成。有卡介苗、炭疽、牛痘、鼠疫、脊髓灰質炎等。
優點：用量小，**力保持時間長。
缺點：不易保存，菌種的無毒或減毒性狀必須很穩定。
2．死疫苗：一般選用抗原性強，毒性也強的菌株或毒株。用化學方法(如：甲醛、苯酚處理)或物理方法(如加熱)殺死而制成。死疫苗有百日咳、傷寒、副傷寒、霍亂、流行性乙型腦炎、斑疹傷寒等。死疫苗易保存且保存期久缺點是注射量大，多數需經幾次注射。
3．自身菌苗：由患者自身病灶中分離的病原菌制成的死菌苗，可**難**的慢性**性感染。如大腸桿菌引起的饅性腎炎等。
1． 亞單位疫苗：提取微生物的有效成分而制成的疫苗稱為亞單位疫苗。如腺病毒的衣殼亞單位疫苗、乙型肝炎的表面抗原亞單位疫苗。亞單位疫苗無副作用，是疫苗的發展方向。
5、基因工程疫苗 應用DNA重組技術將病原微生物的致病基因提取后與載體連接，轉入合適的受體菌中表達基因，將表達產物加工制成的疫苗。
6、DNA疫苗 是一種能誘導機體產生高水平**應答的新型疫苗。
DNA疫苗的優點：能激發機體產生高效持久的體液和細胞**，
制備簡單、純度高，進人機體后即不插人染色體DNA也不復制，**。
DNA疫苗現已廣泛應用于許多感染性**的防止和腫瘤**的研究中，已有人類**缺陷病毒(HIv)、乙則肝炎病毒(HBv)、輪狀病毒及瘧疾等進入臨床實驗。
(二)類**
用0.3—0.4％的甲醛處理外**制得類**。
有：白喉類**和破傷風類**。
(三)**血清
含特異性抗體的血清叫**血清，注射后，可使機體立即獲得**力，以達到**和應急預防的目的。常用的有抗**、胎盤球蛋白和血清球蛋白。如：將類**注射于得到抗**。胎盤球蛋白是從健康產婦的胎盤中提取的兩種球蛋白。血清球蛋白是從血清中提取的兩種球蛋白。
(1)抗** 以類**注射某種動物，一定時期后．可得到針對該類**的動物抗血清**，如白喉抗**、破傷風抗**等。
(2)**血清 以菌體注射于動物后所得到的**血清，以**相應的傳染病。
(3)胎盤球蛋白和血清球蛋白 胎盤球蛋白是從健康產婦的胎盤中提取的丙種球蛋白球蛋白是從血清中提取的兩種球蛋白。。
五、各類**反應的相互關系
各類**反應都有獨特作用，它們是互相聯系、互相配合的。病原微生物侵入機體后。
（1）首先是非特異性**發揮作用，它的作用快，范圍廣，但一般在沒有特異性免異疫協助時，作用微弱。例如補體在沒有抗體協助時，只有微弱的抑菌作用。
（2）在非特異性**的作用過程中，特異性**逐漸形成。特異性**一旦形成，就能增強非特異性**。例如抗體和**因子的調理作用；抗體與病原微生物結合店才能激活補休，而發揮補休的溶菌與**作用。
（3）特異性**的建立一定要有非特異**因素的參加，例如抗體與致斂T細胞的形成一定要有巨噬細胞參與；
（4）抗體不能單獨殺滅微生物需要補體配合。
（5）特異性**中的體液**和細胞**也是互相配合的，由B細胞分化為漿細胞的過程中，需要T細胞傳遞抗原決定基；微生物是復合抗原，不同的抗原決定基刺激不同的**活性細胞，因此常同時形成體液**和細胞**；在體液**和細胞**中，往往以一種**為主。
(6)產生外**的**及其他細胞外寄生菌和大多數病毒，以體液**為主；對細胞內寄生菌(如結核桿菌、麻風桿菌、布氏桿菌等)和少數病毒，則以細胞**為主。