**学方法
一、血清学反应
在体外进行的抗原与抗体的反应称为血清学反应，常用来进行体外体液**功能的测定，传染病的诊断和微生物的分类鉴定。
血清学反应的一般规律
1．反应的组成成分
(1)抗原。
(2)特异抗体。
(3)环境因素：包括基本因素和特殊环境因素。
基本因素：电解质、温度和PH值。实验室多采用0.85％的Nacl水溶液作电解液，温度采用37℃或56℃；PH位采用7．0左右。特殊环境因素视具体反应而定。如补体，吞噬反应需白细胞。
2、反应的基本特点
(1)抗原与抗体的结合具有特异性。
(2)抗原与抗体是分子表面结合，虽相当稳定，但抗原的性质未变。如**与抗体结合后，生活能力未受影响。
(3)只有当抗原与抗体的分子比例适当时，才能结合成大的分子集团，出现肉眼可见的现象。P268图9—12是沉淀反应曲线。抗体是双价，抗原是多价的。
(4)抗原与抗体的结合受环境因素的影响，反应分为结合阶段和反应阶段。
(一)凝集反应：
颗粒性抗原与其特异性抗体在电解质存在条件下，结合成可见的凝集块的反应，称为凝集反应。
参加凝集反应的抗原叫凝集原，抗体叫凝集素。
(1)直接凝集反应：是抗原和相应抗体直接结合的凝集反应。常用的方法有玻片法和试管法。
(2)间接凝集反应：将分子很小胶体状抗原吸附于载体颗粒表面，再与相应抗体结合的凝集反应，称为间接凝集反应。
(3)交叉凝集和凝集吸收试验：若甲、乙两**有共同的抗原2，并分别含有特异抗原1和3，用甲**注射动物则产生抗体I和II。
交叉凝集反应：动物血清既能与甲**起凝集反欧又能够与乙**起凝集反应，此即为交叉凝集反应。
凝集吸收试验：若先用乙**吸收血清中的抗体，则剩下甲**的特异抗体。
（二）沉淀反应：
沉淀反应：可溶性抗原和相应抗体在电解质存在条件下，聚合成细微沉淀的反应。
沉淀原：参加沉淀反应的抗原。可溶性抗原，单位体积小，总面积大。
沉淀素：参加沉淀反应抗体。
沉淀反应与凝聚反应的区别：
凝聚反应：抗原是颗粒性的单个抗原体积大，表面积小，反应需抗体少。
沉淀反应：抗原是可溶性的，单个抗原体积小，总表面积大。反应需抗体多。
① 环状沉淀试验：在一系列试管中，先加入高浓度的**血清（抗体）再徐徐加入不同稀释度的等量抗体，二者形成洁楚交界面，一定时间后，在交界面处出现环状沉淀。此方法简单、灵敏。所用被检材料少、法原管定血速血型。
② 絮状沉淀反应：在一 系列试管中加入抗血清（**血清），再加入不同稀释度的等量抗原，混匀静止一段时间，可出现血色沉淀或絮状沉淀。可用于鉴别检毒，**，类**及抗**的效行。
③ **扩散：是可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内扩散，并进行沉淀
A、 单向扩散：抗体与琼脂混合加入试管底层，上层加抗原溶液，若抗原与抗体相对应，则会在琼脂层的某一部位形成白色沉淀线。
若有数对抗原，抗体相对应，就会形成相应数量的分离沉淀线。单向扩散也可在平皿中进行。平皿中兴建例入抗体，琼脂，凝固，凝固后在平皿内琼脂上挖孔。孔内加抗原，一定时间后，可形成白色沉淀环。
B、 双向扩散：在试管层加抗体琼脂，中层加电性琼脂，上层加抗原。抗原，抗体均向中层扩散，并在中层形成沉淀线（1—多层）。
平皿：将半固体琼脂倾于平皿或平板上，凝固后，挖一个洞，分别滴入抗原体，抗原，抗体向琼脂中扩散。若二者相遇，即可在琼脂层中形成沉淀线。
④**电泳
将琼脂双扩散与琼脂电泳技术相结合的方法。待俭样品(含复合抗原)先在琼脂凝胶板上电泳，将抗原的各个组分在板上初步分开，然后再在点样儿一侧或两侧打槽，加入抗血清．进行双向双扩散。
(三)**荧光技术
抗体与某些特定的荧光物质结合而成为荧光标记抗体，特异性地结合抗原成为荧光标记的抗体抗原复合物．在荧光显微镜下可观察到。荧光素与抗体结合能侦察出抗原所在部位，可用来进行抗原的定位或定性测定。
(四)放射**测定法
是将放射性同传宗的灵敏性和**学抗原—抗体反应的特异性结合起来的一种定量分析方法，能检测生物体液中的微量**活性物质。具有灵敏、特异、精密、准确和快速等特点。
(五)酶联**吸附测定技术
阳联5z仅吸附测定技术(ELISA)是把抗原、抗体的**反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术，即通过化学的方法将酶与抗体或抗原结合起来形成酶标抗体(抗原)。酶标抗体(抗原)仍保持**活性，将它与相应抗原(抗体)起反应，形成酶标记的**复合物。结合在**复合物上的酶，在遇到底物时，形成有色产物。有色产物可通过比色等方法分析测定，从而可定性定量分析抗原或抗体。
（六）补体结合反应：
补体是人和动物血清中的正常蛋白质。它无特异性，不能单独与抗原或抗体结合，只能与抗原、抗体复合物结合。补体、抗原和许多抗原可溶性是它们反应不易观察，故需指示系统。
① 反应系统：抗原、抗体、补体。
② 指示系统：绵羊红细胞，和绵羊红细胞抗体。
③ 反应结果：
A、 阳性（+）：若抗原与抗体相对应，二者形成抗原，抗体复合物。补体与抗原抗体复合物结合，而无游离的补体存在，这时再加入绵羊红细胞（抗原）和绵羊红细胞抗体，二者虽可形成复合物。但由于无补体存在与之结合，则绵羊红细胞不含溶解。故无溶血现象，此反应为阳性反应。
B、 阴性（-）反应：若眼补体存在则有溶血现象为阴性反应。补体不耐热，56℃易失活，补体结合温度为37℃。
用途：补体结合反应常用于梅毒螺旋体及病毒性**的诊断。
二、单克隆抗体技术及其应用
l975年，证明：骨髓瘤细胞与**动物的脾细胞融合形成的杂交瘤细胞，能分泌针对**抗原中的一种抗体。杂交瘤细胞一经建立即具备肿瘤细胞在体外无限繁殖和脾细胞产生抗体的双重功能。经过克隆选择获得单一的克隆。
只产生一种针对单一抗原表位的抗体，称单克隆抗体(McAb)。
单克隆抗体是针对多克降抗体而言的。天然抗原物质是一种复杂的大分子物质，其表面通常具有多个抗原表位。一种抗原物质的多个抗原表位刺激多个**细胞增殖产生多种抗体。属多克隆抗体。
单克隆抗体称为**代抗体，它的问世显示出巳大的生命力和广阔的发展前景。在生物学各领域，尤其是在**诊断中的广泛应用，己取得令人瞩目的进展，而在**和预防中的应用也已成为可能。获得了l984年诺贝尔医学或生理学奖。
(一)单克隆抗体的制备
骨髓瘤细胞具有反复传代的能力，**动物的脾细胞具有分泌抗体的能力．将两者杂交获得的杂交瘤细胞既能在体外传代又能分泌单克隆抗体。制备单抗时首先用抗原**动物，然后取出动物的脾制备脾细胞，将脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，选择分泌单克隆抗体的杂文瘤细胞。
(二)单克隆抗体的应用
1．器官移植
用于肾移植受体的**抑制，使肾中的**细胞减少，取得了好的结果。
2．肿瘤治肾
单抗与化疗、放疗手术相结合，是肿瘤**的一大发展。对弥散性肿瘤，用单抗**较有效。
3．自身**病**
采取体内及体外两种方法。
体外**法：用单抗亲合层析柱除去血液中的自身抗体。
体内**法：注射自身抗体产生细胞的单抗。
4．**缺陷症**
与自身**性**相反，**缺陷病则为出于**系统的缺陷，不能保护机体抗御感染。艾滋病是由于病毒对辅助性T细胞的感染及破坏使患者的**系统不能正常发挥作用，因而对正常人可以抵抗的感染患者却易感。CD4为辅助性T细胞上的病毒受体，抗CD4的抗独特型抗体可守和病毒从而阻断其感染。
5．**
有机磷中毒在农业生产中时有发生，单抗够中和此毒物的毒性。
6．在传染病临床诊断学中的应用
McAb有助于快速鉴定临床分离物，可直接检测临床标本而早期诊断多种传染病。目前已制备出HBsAg、HBeAg、HBcAg及HAV的单抗，并已用于乙型肝炎的临床诊断、流行病学的调查及献血者的筛选。单抗还用于研究抗原等领域。
单克隆抗体的发展主要表现在两方面：
一是对杂文瘤基本技术的改进以解决在短期内微量、弱抗原性抗原的单克隆抗体和人单电隆抗体的制备问题。
二是基因工程抗体的不断摧新，特别是采用原核细胞系统来分离、生产整套抗体，既快速义简便、为单抗生产开辟了一条新途径。
三、基因工程抗体 称为第三代抗体。
基因工程抗体的优点：抗原性低、可按人的意愿加以改造等。
逐渐取代动物源性单抗。
单链抗体（单链可变区片段）：是将抗体重链可变区和轻链可变区用一个连接肽连接成为一个单个的多胀。单链抗体能较好地保持亲代抗体的亲和性和特异性．是一种新的基因**的手段。
双链抗体：是将两种抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因交叉连接．形成‘杂交”的单链抗体基因，表达后，两条单链抗体双链抗体自动互相折叠，形成以加或双特异性抗体片段。
****：又称生物导弹，由导向性的载体分子与具有毒性的弹头蛋白进行交联制备，是导向**的一种，主要用于**肿瘤。由基因工程抗体和一些配基取代单抗，弹头蛋白也丰富了许多。基因融和可克服化学文联所产生的交联物均一性差的缺点。
四、天然**与获得性**
特异性**的获得方式可分为（天）自然**和人工**两大类，每—类又有自动**和被动**两种形式。
自动**和被动**的区别：
（1）自动**：产生慢(1--4周)，可表现出再次反应或增强反应，维持的时间长，半年到数年甚至终身。
（2）被动**：使机体立即获得**力，产生快，不表现出增强反比，维持的时间短，2—3周。用于**某些传染病或预防。
(一)天然**
天然**（自然特异性获得性**）：是机体在生活过程中自然建立起来的。
患过天花、麻疹、伤寒等传染病或隐性感染后．就可获得对上述**的**力。胎儿通过胎盘或婴儿通过母乳也可从母体获得**力。
自然自动**：传染病或隐性感染后所获得的**力是机体受微生物抗原刺激后，在自然情况下自体产生的**力。
自然被动**：通过胎盘或母乳获得的**力是母体在自然情况厂产生的，而不是自己产生的。
(二)人工**
通过人为的方式获得自动**与被动**。
人工自动**：人工给机体注射抗原物质，使机体**系统因抗原刺激而发生类似感染时所发生的**过程，从而获得特异性**力。
人工被动**：人工给机体注入**血清(含特异性抗体)使机体直接获得一定的**力。
(三)生物制品
凡是人工**用的抗原和抗体制品以及诊断用的抗原和抗体制品。
分为疫苗、类**和**血清三大类。
前两类用于人工自动**，后一类用于人工被动**。
(一)疫苗
由病原微生物本身制备而成。**制品常称为菌苗立克次氏体制品常称为疫苗。
1．活疫苗：用失去毒力或减低毒力，但仍保持抗原性的病原体突变体制成。有卡介苗、炭疽、牛痘、鼠疫、脊髓灰质炎等。
优点：用量小，**力保持时间长。
缺点：不易保存，菌种的无毒或减毒性状必须很稳定。
2．死疫苗：一般选用抗原性强，毒性也强的菌株或毒株。用化学方法(如：甲醛、苯酚处理)或物理方法(如加热)杀死而制成。死疫苗有百日咳、伤寒、副伤寒、霍乱、流行性乙型脑炎、斑疹伤寒等。死疫苗易保存且保存期久缺点是注射量大，多数需经几次注射。
3．自身菌苗：由患者自身病灶中分离的病原菌制成的死菌苗，可**难**的慢性**性感染。如大肠杆菌引起的馒性肾炎等。
1． 亚单位疫苗：提取微生物的有效成分而制成的疫苗称为亚单位疫苗。如腺病毒的衣壳亚单位疫苗、乙型肝炎的表面抗原亚单位疫苗。亚单位疫苗无副作用，是疫苗的发展方向。
5、基因工程疫苗 应用DNA重组技术将病原微生物的致病基因提取后与载体连接，转入合适的受体菌中表达基因，将表达产物加工制成的疫苗。
6、DNA疫苗 是一种能诱导机体产生高水平**应答的新型疫苗。
DNA疫苗的优点：能激发机体产生高效持久的体液和细胞**，
制备简单、纯度高，进人机体后即不插人染色体DNA也不复制，**。
DNA疫苗现已广泛应用于许多感染性**的防止和肿瘤**的研究中，已有人类**缺陷病毒(HIv)、乙则肝炎病毒(HBv)、轮状病毒及疟疾等进入临床实验。
(二)类**
用0.3—0.4％的甲醛处理外**制得类**。
有：白喉类**和破伤风类**。
(三)**血清
含特异性抗体的血清叫**血清，注射后，可使机体立即获得**力，以达到**和应急预防的目的。常用的有抗**、胎盘球蛋白和血清球蛋白。如：将类**注射于得到抗**。胎盘球蛋白是从健康产妇的胎盘中提取的两种球蛋白。血清球蛋白是从血清中提取的两种球蛋白。
(1)抗** 以类**注射某种动物，一定时期后．可得到针对该类**的动物抗血清**，如白喉抗**、破伤风抗**等。
(2)**血清 以菌体注射于动物后所得到的**血清，以**相应的传染病。
(3)胎盘球蛋白和血清球蛋白 胎盘球蛋白是从健康产妇的胎盘中提取的丙种球蛋白球蛋白是从血清中提取的两种球蛋白。。
五、各类**反应的相互关系
各类**反应都有独特作用，它们是互相联系、互相配合的。病原微生物侵入机体后。
（1）首先是非特异性**发挥作用，它的作用快，范围广，但一般在没有特异性免异疫协助时，作用微弱。例如补体在没有抗体协助时，只有微弱的抑菌作用。
（2）在非特异性**的作用过程中，特异性**逐渐形成。特异性**一旦形成，就能增强非特异性**。例如抗体和**因子的调理作用；抗体与病原微生物结合店才能激活补休，而发挥补休的溶菌与**作用。
（3）特异性**的建立一定要有非特异**因素的参加，例如抗体与致敛T细胞的形成一定要有巨噬细胞参与；
（4）抗体不能单独杀灭微生物需要补体配合。
（5）特异性**中的体液**和细胞**也是互相配合的，由B细胞分化为浆细胞的过程中，需要T细胞传递抗原决定基；微生物是复合抗原，不同的抗原决定基刺激不同的**活性细胞，因此常同时形成体液**和细胞**；在体液**和细胞**中，往往以一种**为主。
(6)产生外**的**及其他细胞外寄生菌和大多数病毒，以体液**为主；对细胞内寄生菌(如结核杆菌、麻风杆菌、布氏杆菌等)和少数病毒，则以细胞**为主。