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BCA 蛋白定量试剂盒

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产品名称: BCA 蛋白定量试剂盒
产品型号: Obb-301002
产品展商: 国产
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简单介绍

BCA 蛋白定量试剂盒：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。


BCA 蛋白定量试剂盒  的详细介绍
BCA  蛋白定量试剂盒
产品简介：
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA 法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
 
产品组成：

产品组成
301001（250 assays）
301002(1000 assays)
蛋白标准(1mg/ml)
0.5ml
          2ml
BCA试剂A
50ml
          200ml
BCA试剂B
1ml
4ml

 
使用方法：
A． 96孔酶标板测定：
1.       BCA工作液配制。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml
   BCA试剂A加100μlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml
   BCA试剂A加100μlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml
   BCA试剂A加100μlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。
2.       标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：

孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白标准（ml）
0
1
2
4
8
12
16
20
去离子水（ml）
20
19
18
16
12
8
4
0
BCA工作液（ml）
200
200
200
200
200
200
200
200
对应的蛋白含量（mg）
0
1
2
4
8
12
16
20

 
3.       振荡混匀后，37℃放置30分钟。
4.       用酶标仪测定A562，以不含BSA的光吸收值为空白对照。
5.     以蛋白含量（mg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
6.       样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取20ml样品，加入200ml BCA工作液，混匀后37℃放置30分钟，然后以0号孔为对照，测定样品吸收值A562。
7.       根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
8.       计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积20ml，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
 
B． 比色皿测定
        按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。
 
储存条件：
BCA试剂室温保存。蛋白标准-20°C保存。        有效期：一年。
 
注意事项：
1.      在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解, 如发现**污染则应丢弃。
2.      因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非**控制显色反应 的时间和温度，否则如需**测定，每次测定都需重做标准曲线。若需得到更为**的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
3.      若测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色 没有明显变化，原因可能是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性，参见附件BCA蛋白浓度测定兼容性表。
4.      试剂A 与试剂B 用应密闭保存。
5.      当试剂A 和B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失。
6.      使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。
附表：

以下是不干扰BCA方法测定的物质浓度：
成分
相容浓度
成分
相容浓度
NP-40
5.0%
葡萄糖
10mM
Emulgen
1.0%
EDTA
10mM
Hepes
100mM
Sodium Chloride
1.0M
DTT
1mM
NaOH
0.1M
Guanidine•HCl
4.0M
Ammonium Sulfate
1.5M
Triton X-100
5.0%
乙酸钠 pH 5.5
200mM
辛基糖苷
5.0%
SDS
5.0%
Urea
3.0M
Brij-35
5.0%
蔗糖
40%
Lubrol
1.0%
Glycine, pH 2.8
100mM
CHAPS
5.0%

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