大(小)鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書 大(小)鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書
【產品規格】
200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:
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名稱
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產品編號
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規格
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A
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中性粒細胞分離液試劑 A
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200ml
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B
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樣本稀釋液
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2010C1119
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200ml
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C
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清洗液(贈品)
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2010X1118
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200ml
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D
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紅細胞裂解液(贈品)
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NH4CL2009
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100ml
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E
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紅細胞沉降液(6%羥乙基淀粉)
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HES-TBD550-80
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80ml
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F
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說明書
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1 份
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【實驗前準備】
適用儀器:*大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
1取一支 15ml 離心管,先加入中性粒細胞分離液試劑 A:3ml,后加入 80%濃度試劑 A溶液(中性粒細胞分離液試劑 A:樣本稀釋 液=4:1 的混合液):1.5ml,形成梯度界面。
2制備血液樣本:抗凝血液與紅細胞沉降液按 1:1 比例混勻后,小心加于分離液梯度界面之上,800g 離心 20min。
3離心后,血漿層下出現兩層白色環狀細胞層,取下層白色環狀中性粒細胞層(會有少量紅細胞混雜),加 3-5 倍體積清洗液混勻,400g 離心 10min。
4離心后棄上清,后可通過兩種方法去除紅細胞。
方法一:細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞(具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”)。
方法二:
1細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸,加于 3ml 中性粒細胞分離液試劑 A 之液面上,400g 離心 20min。
2取白色環狀細胞層,加 3-5 倍體積清洗液混勻,250g 離心 10min,重復洗滌 2-3 次,獲得目的細胞(如仍有少量紅細胞混雜,使用紅細胞裂解液去除紅細胞)。
【注意事項】
1全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得*佳的實驗結果,*好在取血 2h 內進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2本實驗*好不使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。
3分離液用量大于血液樣本時,分離效果更佳。
4請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑,否則影響分離效果(離心后,紅細胞不能完全沉至離心管底部)。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染**,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
【相關實驗技術方案】
1所獲得中性粒細胞的培養技術。
2所獲得中性粒細胞的核酸提取技術。
3所獲得中性粒細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.**組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR 技術
【可能存在的問題及解決方法】
1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
出現情況
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出現原因
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建議解決方案
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離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層
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轉速過小或離心時間過短
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適當增減轉速
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離心后目的細胞存在于分離液中
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轉速過大或離心時間過長
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離心后白環層彌散
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細胞密度過大
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調整細胞密度
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離心后白環層太淺或看不見
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細胞密度過小
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2本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時,恒定離心時間,對離心轉速進行調整。
3本分離液依照國際標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產同類產品略有不同,可能出現紅細胞沉降不完全的情況,可以適當加大離心轉速。
注:在對離心條件進行調整時,離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到*佳分離效果,離心力*小不得小于 400g,*大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
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