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弗氏完全佐劑介紹

 弗氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液,能夠非常有效的誘導產生高滴度的抗體。弗氏完全佐劑含結核分枝桿菌的細胞壁成分,可以加強對抗原的抗體反應。佐劑活性來自于油滴中**原的持續釋放,并刺激局部**反應。簡單的說,這個注射入哺乳動物皮下之后,會產生炎癥和疼痛。

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弗氏佐劑是現在動物實驗中*常用的佐劑,分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成,組分比為1~5:1,可根據需要而定,通常為2:1。不完全佐劑中加卡介苗(*終濃度為3~20mg/ml)或死的結核分枝桿菌,即為完全弗氏佐劑(FCA)。 一般**注射時用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進行乳化,**次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑,則抗原量增大10-20倍。[1] 
配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內,用超聲波使之混勻,高壓**,置5℃下保存備用。
在**動物前,先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合,佐劑和抗原體積比一般為1:1,制備成 "油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復合物,注射入動物體內時一定要保持乳化狀態。抗原用量視抗原分子量不同及**原性及**動物不同而有一定差異,無統一標準和固定模式。一般是每兔(約2kg重)或每羊(約20kg重)第1次注射抗原2mg,以后逐次增加抗原量,*多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行:
(1) 研磨法:先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內,待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液,邊滴邊按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,繼續研磨一段時間,使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原,缺點是研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大。
(2) 注射器混合法:將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內,兩注射器之間以一細膠管相連,注意排凈空氣,然后交替推動針管,直至形成粘稠的乳劑為止。本法優點是容易做到無菌操作,抗原損失少,適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全,個別抗原,用塑料注射器根本推不動,而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴狀浮于水面,即乳化完全,為合格的油包水劑。

 

(3) 超聲:實驗室條件好點的,比如說有超聲破碎儀的,一定要控制超聲頻率和時間,超聲容易激發一些自由基,對抗原有未知損害。乳化方法要根據抗原和需要而定。

 

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其他**佐劑的物質

弗氏佐劑也屬于**佐劑。其他**佐劑的物質有:①微生物及其產物,常用的微生物有分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖,自分枝桿菌的提取物質胞壁酰二肽等。②多聚核苷酸,如多聚肌苷酸:胞苷酸(poly1:C),多聚腺苷酸(poly1:A:μ)等;。③無機物,如明礬及氫化鋁等。

 

佐劑的作用機制尚不完全清楚:①它可能增加抗原的表面面積,易為巨噬細胞所吞噬;②延長抗原在體內的存留期,增加與**細胞接觸的機遇;③誘發抗原注射部位及其局部**結的炎癥反應,有利于刺激**細胞的增殖作用。