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白細胞分離：（加速紅細胞沉降法）
 
加速紅細胞沉降法   利用高分子量的聚合物促使紅細胞凝聚成串錢狀，從而加速紅細胞沉降，使
之與白細胞分離。                  
常用的高分子聚合物有明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纖維素等。    
（1）   試劑及配制                
3%明膠（灝洋生物產）（粘度為25泊以上）：選取上等明膠，用生理鹽水配成3%溶液，置沸水
浴加熱溶解，分裝，高壓蒸汽滅              
菌8磅15-20min.                  
6%右旋糖酐（灝洋生物產）（分子量200-400KD）：用生理鹽水配制。                                 
操作方法分為2種。                
   **種：①取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水溶液中，混勻或用3份血液與1份3%明膠溶液混
勻；②將試管直                  
立靜置室溫或37℃溫箱中30-60min,利用明膠與紅細胞的粘合作用，促使紅細胞快速下沉，而白
細胞留在明膠溶液                  
中；③用毛細吸管吸取富含白細胞的上層液，移入另一試管中；④按自然沉降法④-⑤操作。  
   **種：①取1份右旋糖酐溶液加等量抗凝血，混勻；②按操作方法1的②-④操作。    
外周血單個核細胞分離試劑：（聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法）        
外周血中單個核細胞（PBMC）包括**細胞和單核細胞，其體積、形狀和比重與其他細胞不同，
紅細胞和多核                  
細胞比重較大，為1.092左右，而**細胞和單核細胞比重為1.075左右。利用比重1.077左右的分
層液作密度梯度                  
離心，使一定比重的細胞按相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。      
1．試劑及配制                   
⑴聚蔗糖泛影葡胺分層液（LTS1077）：（灝洋生物有成品供應），比重為1.077±0.001    
⑵臺盼藍染液：稱取4g臺盼藍，于研缽中用少量雙蒸水研磨，加雙蒸水至100ml ,1500r/min離心
15min,吸出上層液，                
即為4%水溶液。用前，1.8%氯化鈉溶液1倍，即為2%臺盼藍染液。        
2.操作方法                    
⑴取靜脈血放入抗凝管，搖允，用Ph7.2-7.6 Hank 液稀釋血液1-2倍。      
⑵取LTS1077聚蔗糖-泛影葡胺分層液（灝洋生物產）3-4ml,放入15X150mm試管中。    
⑶用毛吸管吸取稀釋血液，在離分層液上1cm處，沿試管壁徐徐加入，使稀釋血液重疊于分層液
上，稀釋血液與                  
分層液體積比例約為2：1。                
⑷用水平離心機以2000r/min離心30min,離心后管內容物分為三層，上層為血漿（內含血小板），
中間層為分層液，                  
底層為紅細胞和多核白細胞。在上、中層液體界面處可見到乳白色渾濁的單個核細胞層。     
⑸用毛細吸管輕輕插到白膜層，沿試管壁周緣吸取界面層單個核細胞，移入另一試管中。    
⑹加5倍以上體積不含Ca2+、Mg2+Hank液，混勻，1500r/min離心10min,吸棄上清，重復洗滌2次。  
⑺末次離心后，吸盡上清。按每毫升血液標本加0.2ml含20%小牛血清Hank液重新混懸細胞。取1
滴細胞懸液置血                  
6                  
球計數板內計數。然后細胞濃度調節至2X10 /ml                                 
⑻細胞活力檢測：取1滴細胞懸液加1滴2%臺盼藍染液混勻，加蓋片，顯微鏡高倍鏡檢。活細胞
不著色，折光強；                  
死細胞被染成藍色，體積略膨大。活細胞數應在95%以上。          
3．注意事項                  
⑴用稀釋后的全血可是單個核細胞得率高，將稀釋的血液疊加于分層液上時，一定要細心，動作
要輕，避免沖散                  
分層液面或與分層液混合而影響分離結果。            
⑵配制單個核細胞懸液所用的培養液要求等滲，具緩沖作用，并對細胞無毒性。      
⑶吸取單個核細胞時，應避免吸出過多上清液或分層液而導致血小板污染。      
⑷配制好的單個核細胞可放室溫或0-4℃，后一條件較好，可減低細胞代謝活動。注意不要迅速
改變其所出的溫                  
度，以免造成“溫度”休克。                             
通用型細胞分離液（LTS1130） 的比重的配方（灝洋生物產）        
取比重LTS1077的人**細胞分離液（灝洋生物產） 3ml ,放入15X150mm試管中。    
用PBS將肝素抗凝血稀釋1-2倍后，將稀釋全血加到LTS1077分離液上，稀釋的血液：分離液約為
2：1。                    
用水平離心機以1500r/min離心10min,離心后，單個核細胞位于血漿和分離液的界面層，紅細胞和
粒細胞沉淀在                  
分離液層下，一部分單核細胞和血小板位于分離液層上。          
吸取界面單個核細胞層，用PBS洗三次。            
用適當的培養液重疊單個核細胞，配成所需濃度的細胞。          
用臺盼藍拒染法檢查細胞活力。              
NK細胞分離試劑：細胞分離液不連續梯度分離法            
          通用型細胞（LTS1130）分離液，為無毒、無刺激的新型密度梯度離心分離劑。其在離
心過程中會自然                  
形成密度梯度，從而將不同密度的細胞分離出來
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