BCA 蛋白定量試劑盒

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產品名稱: BCA 蛋白定量試劑盒

產品型號: Obb-301002

產品展商: 國產

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簡單介紹

BCA 蛋白定量試劑盒：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。

BCA 蛋白定量試劑盒 的詳細介紹

BCA 蛋白定量試劑盒
產品簡介：

堿性條件下，蛋白將Cu²⁺還原為Cu⁺， Cu⁺與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。

BCA 法快速靈敏、穩定可靠，對不同種類蛋白質檢測的變異系數非常小。BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。在組織細胞蛋白提取過程中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

產品組成：

產品組成	301001（250 assays）	301002(1000 assays)
蛋白標準(1mg/ml)	0.5ml	2ml
BCA試劑A	50ml	200ml
BCA試劑B	1ml	4ml

使用方法：

A． 96孔酶標板測定：

1.       BCA工作液配制。根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml
   BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內穩定。根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml
   BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內穩定。根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml
   BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內穩定。

2. 標準曲線繪制。取一塊酶標板，按以下表格數據加入試劑：

孔號	0	1	2	3	4	5	6	7
蛋白標準（ml）	0	1	2	4	8	12	16	20
去離子水（ml）	20	19	18	16	12	8	4	0
BCA工作液（ml）	200	200	200	200	200	200	200	200
對應的蛋白含量（mg）	0	1	2	4	8	12	16	20

3. 振蕩混勻后，37℃放置30分鐘。

4. 用酶標儀測定A562，以不含BSA的光吸收值為空白對照。

5. 以蛋白含量（mg）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。

6. 樣品測定：將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當濃度，取20ml樣品，加入200ml BCA工作液，混勻后37℃放置30分鐘，然后以0號孔為對照，測定樣品吸收值A562。

7. 根據測得的吸收值，在標準曲線上即可查得樣品的蛋白含量。

8. 計算蛋白濃度：以查得的蛋白含量除以樣品體積20ml，再乘以相應的稀釋倍數即可得到待測樣品的實際濃度。

B．比色皿測定

按照比色皿規格，與以上方法相同，適當按比例增加各溶液體積即可。

儲存條件：

BCA試劑室溫保存。蛋白標準-20°C保存。 有效期：一年。

注意事項：

1. 在低溫條件或長期保存出現沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發現**污染則應丟棄。

2. 因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非**控制顯色反應的時間和溫度，否則如需**測定，每次測定都需重做標準曲線。若需得到更為**的蛋白濃度結果，每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。

3. 若測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，原因可能是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。BCA蛋白濃度測定試劑盒對樣品中各種物質詳細的兼容性，參見附件BCA蛋白濃度測定兼容性表。

4. 試劑A 與試劑B 用應密閉保存。

5. 當試劑A 和B 混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失。

6. 使用溫箱孵育時，應注意防止因水份蒸發影響檢測結果。

附表：

以下是不干擾BCA方法測定的物質濃度：
成分	相容濃度	成分	相容濃度
NP-40	5.0%	葡萄糖	10mM
Emulgen	1.0%	EDTA	10mM
Hepes	100mM	Sodium Chloride	1.0M
DTT	1mM	NaOH	0.1M
Guanidine•HCl	4.0M	Ammonium Sulfate	1.5M
Triton X-100	5.0%	乙酸鈉 pH 5.5	200mM
辛基糖苷	5.0%	SDS	5.0%
Urea	3.0M	Brij-35	5.0%
蔗糖	40%	Lubrol	1.0%
Glycine, pH 2.8	100mM	CHAPS	5.0%