技术文章
首页 >>> 技术文章

预染蛋白marker
   蛋白marker可分为未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准以及预染的Marker即单色预染和多色预染。那么，什么是预染蛋白marker？预染蛋白marker为一些纯化好的蛋白的混合物.这些蛋白混合物与一种蓝色染料共价偶联.可在凝胶电泳时出现强度均匀的8条带.同未预染的蛋白marker相比,预染蛋白marker因与染料共价偶联而在SDS-PAGE电泳时的迁移特性发生某些改变.
    预染蛋白分子量标准：预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率   比如，已知垂直电泳*佳分辨区域大约在胶的2/3处，如果使用预染蛋白Marker就可以预测目标蛋白进入*佳分辨区时停止电泳以得到*佳分辨效果，如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳，另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全，还可以在膜上标记蛋白分子量，所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合**定位蛋白  不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样，我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小，*后都需要Western来定性，所以如果不是要区分大小相近的条带，预染Marker还是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
    预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染，其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小—Marker条带越多参考价值越大，可就越难辨认区分，如果用不同的颜色来区别就比较好辨认。单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意，由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上，所以需要的上样量相对少一些，如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”，或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。
非预染蛋白marker和预染蛋白marker有什么区别
    非预染蛋白marker电泳时看不到条带，染色后才能看到，而预染蛋白marker会有特定的某些蛋白条带带有颜色，电泳过程中可以观察到，还有在WB过程中也起到转膜是否成功的指示作用。
    预染的marker的分子量在不同浓度胶上跑出来是不一样的，这个叫表观分子量。未预染的marker是*准确的，如果只做wb，预染的marker就够了，每次都能观察转膜情况。
    其他都是些细节上的区别，比如有些预染蛋白marker会做成彩虹色的，以便区别分子量大小有些预染蛋白marker的条带比较多等等。
上一篇：鉴定用药敏纸片
下一篇：**药敏试条（E-test法）