人富含 NK 活性大颗粒**细胞(LGL)的纯化试剂盒实验方法
【产品规格】
100ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用,试剂内容如下:
名称
产品编号
规格
A
密度梯度分离液原液
NK2011H-A
100ml
B
梯度制备稀释液
NK2011H-B
C
说明书
1份
适用仪器:*大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
1. 收集从外周血中分离的单个核细胞(人全血单个核细胞分离液,产品货号;LDS1075): 1×108 个悬于 1ml 无血清培养基中。
2. 梯度分离溶液制备,使用使用梯度制备稀释液参考下表将原液稀释至所需浓度:
原液浓度(%)
83%
79%
73%
70%
66%
比重(g/ml)
1.067
1.064
1.061
1.058
1.056
3. 梯度分离层的制备:将梯度分离液由高密度至低密度逐层加入至 10ml 离心管(试管)内,每层约 1.2-1.5ml 加入后应可见明显的梯度界面,同时标记 70%层上部界面及 73% 底部界面位置。
4. 上样:将单个核细胞单细胞悬液 1ml 加至梯度界面上。
5. 离心:400g,离心 20-25min。
6. 取样:吸取 73%与 70%溶液界面及上下两层分离溶液(即步骤 3 标记位置之间的溶液),
细胞经洗涤后供后续试验。
注:样本量加大时请客户按选取对应耗材且按比例增加试剂用量,但应注意加入试剂及样本
后总体积不超过离心管总体积的 2/3。
【注意事项】
1. 实验全过程需在 20℃±2℃下进行,否则影响离心效果。
2. 由于多层分离溶液之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
3. 试剂瓶盖需盖紧,防止蒸发和污染。
【储存条件及有效期】常温保存,有效期 2 年。本品易感染**,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。