各种动物外周血中性粒细胞分离液 KIT 说明书

【产品规格】200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。根据样本量大小，分以下两种情况：

 情况 A：血液样本量小于 5ml 时，实验方法如下：

 1. 取一支 15ml 离心管，小心加入 5ml 试剂 A。

 2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-550g ，离心 20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*佳分离效果。）

3. 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。

 4. 用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）将红细胞裂解（具体方法见“红细胞裂解液使用说明”）即得目的细胞。

 5. 将获得的细胞层移至另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

 6. 250g，离心 10min。

 7. 弃上清。

 8. 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

 9. 250g，离心 10min。

 10. 重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

 情况 B：血液样本量大于等于 5ml 时，实验方法如下：

 1. 取一支适当的离心管，依次小心加入试剂 A,试剂总量与稀释后的样本量相等。

 2. 将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（*大离心力可至 1000g），离心 20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。

 3. 剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 至步骤 10。

 【注意事项】

 1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得*佳的实验结果，*好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

 2. 本实验*好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

 3. 分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。

 4. 血液样本不需稀释，直接进行分离即可。

 5. 如实验后细胞得率或活性过低，请联系TBD技术支持以寻求帮助。

 【储存条件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染**，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

 【参考值（参考范围）】

 本实验中性粒细胞提取率大于 80%。

 下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

1. 所获得中性粒细胞的培养技术。

2. 所获得中性粒细胞的核酸提取技术。

3. 所获得中性粒细胞的鉴定方法

A.流式细胞技术

B.**组化技术

C.原位杂交技术

D.PCR 技术

【可能存在的问题及解决方法】

 1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

 2. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

 3. 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

 注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到*佳分离效果，

 离心力*小不得小于 400g，*大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。