抗体稀释液和ELISA相关溶液的配制
1、抗体或**球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBS
NaH2PO4·2H2O
0.39克
Na2HPO4
1.27克
NaCl
0.85克
NaN3
200mg
H2O(蒸馏水)
至 1000ml
2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4,PBST
2.0克
KH2PO4
0.2克
Na2HPO4·12H2O
2.9克
KCl
H2O
吐温(Tween)20
0.5ml
4°C保存备用
3、包被液(简称CB)pH9.6
Na2CO3
1.59克
NaHCO3
2.93克
密封盖好,4°C存放备用
4、ELISA底物液(可溶性底物)
磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.0
0.1mol/L柠檬酸(21.014克/100ml)
24.3ml
0.2mol/L Na2 HPO4(28.4克/1000ml)
25.7ml
50ml
4°C存放备用
5、DAB底物液(不溶性底物,组化病理等)
0.05mol/L pH7.6 Tris-HCL
Tris
6.05克
HCL(36%)
3.15克(约2.7ml浓HCL)
DAB为3´,3´二氧基联苯胺,不溶性底物,呈棕红色
6、DAB溶液配制:(组化及Western blot 显色) 称DAB30mg,用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀,过滤后使用,一般新鲜配制使用。用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2浓度为0.01%,混均后使用。 7、3´,3´,5´,5´,-四甲基联苯胺(TMB)溶液配制: 用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或无水乙醇,将TMB配成1%浓度,4°C保存半年以内使用。使用前,用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1%TMB液,再按每毫升TMB加入30%的H2O2 1ul,混匀后立即使用。2N H2SO4终止后,450nm测定OD值。
8、1%离子琼脂胶配制液 作**双相扩散,单相扩散及**电泳中使用。 0.05UpH8.6***钠-HCL缓冲液
***钠
23.8克
1mol/L HCL
34.5ml
2150ml