试剂盒简介:
白介素-8(IL-8)是嗜中性粒细胞特异性的CXC家族的趋化因子成员之一,是一个潜能的嗜中性粒细胞趋化因子与激活因子。IL-1、TNF、LPS和PMA均能诱导单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞和表皮细胞等合成和分泌IL-8。PHA等丝裂原活化的T细胞也可产生IL-8。人类多种肿瘤细胞均可高表达IL-8。其中甲状腺癌、鳞状细胞癌、 黑素瘤等可组成性产生IL-8,而星状细胞瘤、肝癌、肾细胞癌等则需在IL-1β或TNF-α等刺激下才合成和分泌IL-8。
IL-8分子量8.3kDa,不成熟的IL-8为99个氨基酸,单核细胞产生的成熟IL-8分子主要形式为72个氨基酸,而内皮细胞产生的成熟IL-8分子主要为77个氨基酸。在α亚族中,IL-8与GROα、GROβ、GROγ、ENA-78和NAP-2相对有较高源性。 IL-8分子含4个Cys,无N糖基化位点,IP8.0~8.5,耐热、耐碱,但对巯基化合物敏感。
IL-8的生物学活性:(1)趋化和激活中性粒细胞,IL-8可使中性粒细胞外形改变,促进其脱颗粒,激活中性粒细胞并使其产生呼吸爆发(respiratory burst)、释放超氧化物(O2-、H2O2)和溶酶体酶;(2)趋化嗜碱性粒细胞,并刺激其释放组织胺,可能与速发型超敏反应的发生有关。 此外,还可刺激GM-CSF或IL-5预先处理的嗜酸性粒细胞的脱颗粒作用;(3)趋化T**细胞,可趋化部分静止的CD4+或CD8+T细胞;(4)IL-8是角化细胞的复合促有丝分裂原(co-mitogen), 也是黑素瘤细胞的自分泌生长因子。
本实验采用双抗体夹心法。抗人IL-8单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的IL-8会与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-8抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合;抗人IL-8抗体与结合在单抗上的人IL-8结合而形成**复合物,游离的成分被洗去加入显色剂,若反应孔中有IL-8,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450 nm处测OD值,IL-8浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中IL-8浓度。
本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆上清液中人IL-8浓度,供科研使用。
试剂盒内容物:
产品名称
规格
1a标准品
2支(冻干)
1b标准品稀释液
1瓶
2a浓缩生物素化抗体
1支
2b生物素化抗体稀释液
3a浓缩酶结合物
3b酶结合物稀释液
4浓缩洗涤液20×
显色液
终止液
抗体包被板条
8*12
封板胶纸
3张
说明书
1份
保存条件:
4℃保存,6个月有效。
注意事项:
1. 短期内使用可将试剂盒保存在2-8℃,如长时间请于-20℃保存。
2. 浓缩生物素化抗体(2a),浓缩酶结合物(3a)装量极少,运输中可能会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,加热使结晶完全溶解后再使用。
4. 不建议重复使用标准品。
5. 充分混匀对反应结果尤其重要,*好使用微量振荡器,也可在反应过程中手工混匀。
6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔。
7. 为了您的**和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。