1976年Morgan等发现小鼠脾细胞培养上清中含有一种刺激胸腺细胞生长的因子,由于这种因子能促进和维持T细胞长期培养, 称为T细胞生长因子 (T cell growth factor, TCGF),1979年统一命名为白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)。
1. IL-2的产生 IL-2主要由T细胞或T细胞系产生。
(1)CD4阳性或CD8阳性T细胞:有丝分裂原刺激CD4阳性或CD8阳性T细胞亚群均可产生IL-2同种异体抗原主要刺激 CD4阳性T细胞分泌IL-2。PBMC、脾脏、**结和扁桃腺中的T细胞受到刺激后都能产生IL-2。在小鼠Th细胞中,只有Th1亚群可产生IL-2。
(2)T细胞肿瘤细胞系或白血病细胞系: 人和动物某些T细胞白血病细胞系或肿瘤细胞在有丝分裂原、钙离子载体(如 A23187) 或PMA刺激下可产生高水平的IL-2。如长臂猿T细胞系MLA144可自发产生IL-2,小鼠胸腺瘤细胞系EL-4和人Jurkat细胞静止状态不合成和分泌IL-2,刺激后可分泌高水平的IL-2。
(3)T**细胞杂交瘤: T**细胞杂交瘤123,FS6-14.13, HT-24A等在ConA刺激下产生IL-2。
(4)应用基因工程技术制备: 1983年Taniguchi等从ConA刺激的Jurkat白血病T细胞中克隆成功IL-2cDNA,并在大肠杆菌中得到高水平的表达。目前应用基因工程技术所制备和纯化的IL-2已用于临床**某些肿瘤和其它**。
2. IL-2的分子结构和基因 人IL-2含有133氨基酸残基,分子量为15.5kDa。天然IL-2在N端含有糖基,但糖基对IL-2的生物学活性无明显影响,等电点在6.6~8.2。 IL-2分子含有3个半胱氨酸,分别位于第58、105和125位氨基酸,其中58位与105位半胱氨酸之间所形成的链内二硫键对于保持IL-2生物学活性起重要作用。在IL-2基因产物的提纯和复性过程中,如二硫键配错或分子间形成二硫键都会降低IL-2的活性。现已有应用点突变, 将第125号位半胱氨酸突变为亮氨酸或丝氨基,使只能形成一种二硫键,保证了在IL-2复性过程的活性。还有报道用蛋白工程技术生产新型rIL-2,将IL-2分子第125位半胱氨酸改为丙氨酸, 改构后IL-2比活性比天然IL-2明显增加。人IL-2基因定位于第4号染色体,长约5kb,由4个外显子和3个内含子组成。人和小鼠IL-2基因DNA序列有63%同源性。
本试剂盒采用双抗体夹心法。抗人IL-2单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的IL-2会与单抗结合,加入生物素化的抗人IL-2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合;抗人IL-2抗体与结合在单抗上的人IL-2结合而形成**复合物,若反应孔中有IL-2,会有显色反应。在450 nm处测OD值,IL-2浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中IL-2浓度。
本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆上清液中IL-2浓度,供科研使用。
试剂盒内容物:
产品名称
规格
1a标准品
2支(冻干)
1b标准品稀释液
1瓶
2a浓缩生物素化抗体
1支
2b生物素化抗体稀释液
3a浓缩酶结合物
3b酶结合物稀释液
4浓缩洗涤液20×
显色液
终止液
抗体包被板条
8*12
封板胶纸
3张
说明书
1份
保存条件:
4℃保存,6个月有效。
注意事项:
1. 短期内使用可将试剂盒保存在2-8℃,如长时间请于-20℃保存。
2. 浓缩生物素化抗体(2a),浓缩酶结合物(3a)装量极少,运输中可能会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,加热使结晶完全溶解后再使用。
4. 不建议重复使用标准品。
5. 充分混匀对反应结果尤其重要,*好使用微量振荡器,也可在反应过程中手工混匀。
6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔。
7. 为了您的**和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。上海欧韦达仪器科技有限公司提供上等的分子生物学试剂和试剂盒、培养基和培养耗材、细胞因子和细胞分离液、抗体和elisa试剂盒及常用生物试剂等,大量现货火爆促销中,欢迎拨打021-61805606洽谈选购!