IL-1是一种单核因子。1972年Gery等发现人白细胞培养的上清中含有一种可溶性物质,这种物质可促进小鼠胸腺细胞对植物血凝素(PHA)的有丝分裂反应。 起初命名为**细胞激活因子(lymphocyte-activating factor, LAF)或内源性热原质(endogenous pyrogen)、 破骨细胞激活因子 (osteoclast activating factor)、 黑素瘤细胞生长抑制因子 (melanomagrowth inhibitory factor)等,1979年国际统一命名为IL-1。 1. IL-1的产生 IL-1可由多种细胞合成和分泌。 (1)单核细胞、巨噬细胞(如腹腔粘连细胞peritoneal cell,PC)、 树突状细胞等在摄取抗原抗体复合物后或在抗原提呈过程中可产生IL-1。在大多数刺激剂刺激外周血单个核细胞 (PBMC)条件下,IL-1β mRNA水平要高于IL-1α mRNA 20~25倍。 (2)小鼠巨噬细胞细胞系P388D1、J774、PU5-1.8、 WEHI-3以及人前单核细胞株U937等在脂多糖(LPS)刺激后都能分泌大量的IL-1。 (3)表皮细胞、NK细胞、B细胞、成纤维细胞、内皮细胞、脑胶质星状细胞、肾小球系膜细胞(mesangial cell)、滑膜衬里细胞(synovial lining cell)、平滑肌细胞、上皮细胞、胎盘细胞、白血病细胞、PMN等在某些条件下亦可产生IL-1。 许多因素可以直接影响单核-巨噬细胞IL-1的分泌:①细胞因子如巨噬细胞激活因子(MAF)、集落刺激因子(CSF)、IFN-α、IFN-γ对IL-1产生具有增强作用。②LPS、PPD、BCG和李斯特菌, 葡萄球菌、链球菌外**, 活病毒等也是IL-1产生的刺激剂。 在外周血中20pg/ml内**刺激单核细胞即可产生IL-1,因此在一般培养条件下,由于微量内**的污染可刺激单核细胞分泌IL-1。10ng/ml LPS可使单核细胞合成IL-1增加100倍。③蛋白激酶C(PKC)的激活剂乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbol myristate acetate, PMA)以及钙离子载体(calcium ionophore)如A23187均具有强烈的刺激作用。④皮质类固醇和前列腺素则对IL-1的产生有抑制作用。 2. IL-1的分子结构和基因 完整的人IL-1α和IL-1β基因组分别为10.5kb和7.8kb。人和小鼠IL-1基因定位于2号染色体,均含7个外显子。IL-1前体(ProIL-1)为31kDa,通过蛋白水解酶裂解形成成熟的IL-1分子。IL-1在不同种属中有较高同源性。在氨基酸水平上,IL-1α和IL-1β在不同种属同源性分别为60%~70%和75%~78%;但在同一种属中IL-1α与IL-1β同源性只有25%。人IL-1α(PI5.0)和IL-1β(PI7.0)分别由159和153个氨基酸残基组成,分子量约17.5kDa, 同源性为28%。IL-1对糜蛋白酶敏感。 不同细胞所产生IL-1的等电点可有所差异。
本试剂盒采用双抗体夹心法。抗人IL-1β单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的IL-1β会与单抗结合,加入生物素化的抗人IL-1β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合;抗人IL-1β抗体与结合在单抗上的人IL-1β结合而形成**复合物,若反应孔中有IL-1β,会有显色反应。在450 nm处测OD值,IL-1β浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中IL-1β浓度。
本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆上清液中IL-1β浓度,供科研使用。
试剂盒内容物:
产品名称
规格
1a标准品
2支(冻干)
1b标准品稀释液
1瓶
2a浓缩生物素化抗体
1支
2b生物素化抗体稀释液
3a浓缩酶结合物
3b酶结合物稀释液
4浓缩洗涤液20×
显色液
终止液
抗体包被板条
8*12
封板胶纸
3张
说明书
1份
保存条件:
4℃保存,6个月有效。
注意事项:
1. 短期内使用可将试剂盒保存在2-8℃,如长时间请于-20℃保存。
2. 浓缩生物素化抗体(2a),浓缩酶结合物(3a)装量极少,运输中可能会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,加热使结晶完全溶解后再使用。
4. 不建议重复使用标准品。
5. 充分混匀对反应结果尤其重要,*好使用微量振荡器,也可在反应过程中手工混匀。
6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔。
7. 为了您的**和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。上海欧韦达仪器科技有限公司提供上等的分子生物学试剂和试剂盒、培养基和培养耗材、细胞因子和细胞分离液、抗体和elisa试剂盒及常用生物试剂等,大量现货火爆促销中,欢迎拨打021-61805606洽谈选购!